提及多因子的定量检测，越来越多的小伙伴会第一个想到 Luminex 技术。Luminex 基于微球设计原理，可以在 1 张 96 孔板中定量检测多达 100 种分析物，仅需少量样本，节约时间、经费，可谓一举多得。

R&D Systems® 拥有 Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 两个产品系列，均基于带有颜色编码的微球，这些微球表面包被了识别不同目标分析物的特异性抗体。当预包被的微球与待检样本孵育时，分析物被微球捕获，经由生物素标记的特异性检测抗体混合物识别，加入链霉亲和素 - PE 荧光素底物后发光并进行定量检测。

01  样品粘稠，未有效稀释
解决方法：测定前，如果是冻存的血清 / 血浆样品，第一步需将样品充分解冻（如果样本包含碎片的话也会影响数据的读取）。建议在加样前，将样本进行 16,000 x g 离心 4 分钟，特殊情况下可能要离心更长的时间，再用 Calibrator diluent 按照建议的稀释比对样本进行稀释。

02  进样针孔堵塞，进样针高度不正确
解决方法：以上两种情况都会导致没有充足的微球进入，前者需用超声的方法清洗针孔，如有需要进行替换；后者需确定进样针的高度并调整至合适位置。

也可以进入维护页面，点击 Cmds&Routines，使用 0.1 N NaOH 运行深度清洗。

03  操作有误，清洗步骤中孔板未附磁力架
解决方法：这是新手常常会出现的失误。对于磁珠形式的微球，切记清洗时整个过程都要附有磁力架，确定磁力架正确地结合在微孔板上，洗板时磁力架应置于微孔板底部，弃去洗涤液前应静置 1 分钟。不要吸干，以防止磁珠丢失。

如果磁珠数量少，建议最好不要用自动洗板机清洗，我们发现自动洗板机清洗可能会造成磁珠聚集，从而影响其数量。

​在实际的 Luminex 实验操作中，有客户经常碰到微球数少于 50 个甚至只有几个的问题，极大地影响了实验结果，其可能的原因和解决方法有哪些呢？

如下为正确的手动洗板方式：

除了上述三点外，还要一些细节需要注意

●确保仪器已正确校准，建议每周进行仪器校准，每天验证一次。若仪器使用频率不高，则需要在每次实验前进行校准和验证；

●在实验当天使用验证试剂盒确定仪器功能运行正常；

●设定微球收集数（events/microparticle）为 50，并选择正确的微球类型（通常为磁珠），保证微球数量收集充分以获得准确的统计学结果；

●使用 0.12" orbit（3mm 轨道半径）水平微孔板振荡器，确保振荡器速度符合说明书要求。

以上文字和图片来源于Bio-techne