去年9月份的时候，小编推荐了Abcam的WB新手入门课程（每周一节，共分4节），不知道小伙伴们有没有get到WB的全套技能呢？现在，Abcam推出了实验必备的升级技能---IHC，同样是以每周一次课程的形式。跟着小编学起来吧！

在第 1周的 IHC 培训中，我们将展示如何开启一个良好的开端。如何制备样本将会成为决定最终数据质量的重要影响因素。本次培训中，我们将指导您完成 IHC 最佳样本处理的主要步骤。

1、什么是免疫组化?

免疫组化（immunohistochemistry，IHC）是利用抗原-抗体相互作用显示组织切片中抗原分布和定位的一种方法。

IHC 常用于诊断癌症等疾病中的异常细胞和组织。总体而言，IHC 提供了有价值的观点和支持，使其他方法获得的数据更加有据可依。

IHC 染色依赖于识别靶蛋白的抗体，可以通过两种检测方法对抗原-抗体的相互作用进行可视化，一种是显色方法（酶偶联抗体催化底物显色，产生有色沉淀）；另一种是荧光检测法（荧光基团偶联抗体产生荧光）。

2、标本形式

IHC组织保存的两种主要方法是石蜡包埋和组织冰冻（总结如下）：

3、固定

固定可防止离体组织自溶和坏死，保留抗原特性，提高组织成分的折射率，同时有助于保护样本处理过程中的细胞成分。靶抗原和所需的检测技术都会影响固定剂的选择，如下图所示。

图 1：固定剂对免疫染色效果的影响。和甲醛固定（左）相比，用甲醇固定的 HeLa 细胞（右）中更易检出组蛋白 H2B K5 巴豆酰化免疫组化结果。一抗：ab177139，组蛋白 H2B（K5巴豆酰化）的兔多克隆抗体，1 μg/mL。二抗：ab150081，山羊抗兔 IgG H&L (Alexa Fluor® 488)，0.5 μg/mL。DAPI 染核, ab7291 搭配ab150120 染微管蛋白（红色）。

以下是我们关于固定剂选择的建议：

· 大多数低分子量的蛋白质、多肽和酶：对于细胞/细胞学样本制备，使用 4% 甲醛；对于组织切片，使用 10% 中性福尔马林缓冲（NBF）液；

·  柔软精细组织：Bouin 固定液；

·  氨基酸等小分子：4% 甲醛；

·  造血器官（如肝、脾、骨髓）：Zenker 固定液；

·  结缔组织：Helly 固定液；

·  核酸：Carnoy 固定液；

·  大分子蛋白抗原（如免疫球蛋白）：冰浴丙酮或甲醇（100%）；

·  细胞核形态：福尔马林-硫酸锌溶液；

·  电镜成像：4% 甲醛，1% 戊二醛溶液。

4、包埋和切片

固定组织后需立即处理，以充分保证组织被切成厚度为 4-5 μm 。组织经脱水、透明化，然后浸蜡，以进行切片。本方案包括

·   石蜡组织处理

·   冰冻组织包埋

·   乙二醇甲基丙烯酸酯 (Glycol methacrylate, GMA) 包埋

小结

希望您现在已经具备良好的前期基础，可以开始计划您的 IHC 实验。您应该对样本制备有更多了解，尤其是：IHC 样本保存的两种主要方法，以及组织固定和包埋方法。

下周我们将介绍免疫组化染色原理以及抗原修复、通透化和封闭。

本文内容来源于abcam官网。

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